【Corning】356230 产品使用说明

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Corning 细胞外基质 ECM 生物涂层 Biological Coatings Matrigel Matrix Cell-Tak 细胞和组织粘附剂产品胶原蛋白 Collagen 层粘连蛋白 Laminin PuraMatrix BioCoat Poly-D-Lysine Fibronectin Synthemax vitronectin substrate 356230

Corning® Matrigel® Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix, LDEV-free

（356230）

基底膜是存在于体内细胞下方的薄的细胞外基质。Corning Matrigel Matrix减生长因子（GFR）是从Engelbreth-Holm-Swarm（EHS）小鼠肉瘤中提取的可溶化基底膜制备物，肉瘤富含细胞外基质蛋白。其主要成分是层粘连蛋白（laminin），其次是胶原IV、肝素硫酸蛋白聚糖、接触蛋白/网蛋白。Corning Matrigel Matrix GFR还含有TGF-β、表皮生长因子、胰岛素样生长因子、成纤维细胞生长因子、组织纤溶酶原激活物等生长因子，这些生长因子在EHS肿瘤中自然存在。Corning Matrigel Matrix GFR对于正常和转化的依赖附着的上皮样细胞和其他细胞类型的附着和分化都具有效果。其中包括神经元、肝细胞、Sertoli细胞、鸡晶状体和血管内皮细胞等。Corning Matrigel Matrix GFR会影响成年大鼠肝细胞、血管内皮细胞的基因表达，以及小鼠和人类乳腺上皮细胞的三维培养。它是几种肿瘤细胞侵袭实验的基础，支持体内周围神经再生，并为体外和体内研究血管生成提供必要的基质。Corning Matrigel Matrix GFR还支持免疫抑制小鼠体内人类肿瘤的扩增。Corning Matrigel Matrix GFR可用于未分选的乳腺细胞移植，以及嵌入在Corning Matrigel中的分选上皮亚群。这种基质还被用作癌症干细胞模型，并显示出能增强体内肿瘤生长速率的效果。

Corning Matrigel Matrix GFR是为那些需要比Corning Matrigel Matrix纯度更高和表征更详细的重组基底膜制品而开发的。制备该产品的方法有效地降低了多种生长因子的水平，除了TGF-β可能与胶原IV结合并/或以潜在形式固定在主要组分中，而在纯化过程中分离出来。主要组分：层粘连蛋白、胶原IV和接触蛋白（网蛋白）在制备过程中得到保留，而肝素硫酸蛋白聚糖的水平降低了40-50%。以下表格显示了Corning Matrigel Matrix中生长因子的值与典型批次的Corning Matrigel Matrix GFR相比的情况。

表 1 356230 产品信息

溶解方法

Corning® Matrigel® Matrix GFR 和所有与之接触的培养器皿或培养基都必须预先冷藏/冷冻，因为Corning® Matrigel® Matrix GFR 在10°C以上会开始凝胶。始终将Corning Matrigel Matrix保持在冰上。

将Corning® Matrigel® Matrix GFR 的小瓶浸入冰中并放入4°C的冰箱的后部，过夜解冻。一旦Corning® Matrigel® Matrix GFR 解冻，轻轻摇晃瓶子以确保物质均匀分散。始终将Corning Matrigel Matrix保持在冰上。使用无菌技术处理。将解冻的Corning® Matrigel® Matrix GFR 小瓶放在无菌区域，喷洒70％乙醇于瓶盖上，并晾干。

可以使用预先冷却的移液管轻轻移液Corning® Matrigel® Matrix GFR ，以确保均匀性。将Corning® Matrigel® Matrix GFR 分装到管中，当Corning® Matrigel® Matrix GFR 堵塞尖端或导致移液管测量不准确时，请更换移液管头。如果将凝胶状的Corning® Matrigel® Matrix GFR放置在4°C的冰上24-48小时，可以重新液化。

可以将Corning® Matrigel® Matrix GFR用作薄凝胶层（0.5 mm），在其上播种细胞。细胞也可以在Corning® Matrigel® Matrix GFR内培养，使用1 mm的层厚。过度稀释会导致薄而非凝胶的蛋白质层。这可能对细胞附着有用，但在分化研究中可能不太有效。

使用方法

Corning Matrigel Matrix GFR可以以几种方式使用。薄凝胶法适用于在凝胶表面上培养细胞，厚凝胶法允许您在三维基质中培养细胞，而薄涂层法（无凝胶）则提供了一个复杂的蛋白质层，供您在其上培养细胞。根据您希望实现的最终结果（细胞生长、附着或分化），选择合适的方法。

注意：Corning Matrigel Matrix产品的蛋白质浓度是批次特定的，并在分析证书上提供。为了获得一致的结果，通过计算所需的特定蛋白质浓度（mg/mL）稀释Corning Matrigel Matrix产品。为了保持凝胶的一致性，建议不要将Corning Matrigel Matrix稀释至少于3 mg/mL。使用预冷的无血清培养基来稀释Corning Matrigel Matrix。通过上下移液或在冰上旋转小瓶来混合。

薄凝胶法：

●根据推荐方法解冻Corning ® Matrigel® Matrix GFR。使用冷却的吸管，将Corning Matrigel Matrix GFR混合均匀。

●将培养板放在冰上，每平方厘米培养表面加入50 µl的混合液。

●将培养板放置在37°C的细胞培养箱中，孵育30分钟。

●如有必要，在使用前吸去未结合的物质，并用无血清培养基轻轻冲洗（避免吸管的尖端不会刮伤涂层表面）便可使用。

厚凝胶法：

●根据推荐方法解冻Corning Matrigel Matrix GFR。使用冷却的吸管，将Corning Matrigel Matrix GFR混合均匀。

●将培养板放在冰上。将细胞加入Corning Matrigel Matrix GFR中，并使用冷却的吸管悬浮，每平方厘米培养表面加入150-200 µl。

● 将培养板放置在37°C的细胞培养箱中，孵育30分钟后添加培养基。细胞也可以在这个凝胶上培养。

薄涂层法：

●根据推荐方法解冻Corning Matrigel Matrix GFR。使用冷却的吸管，将Corning Matrigel Matrix GFR混合均匀。

●使用无血清培养基稀释Corning Matrigel Matrix GFR至所需浓度。应进行预实验以确定适用的最佳涂层浓度。

●将稀释后的Corning Matrigel Matrix GFR加入要涂层的容器中。数量应足够覆盖整个生长表面。在室温下孵育一小时。

●吸去未结合的物质，并使用无血清培养基轻轻冲洗，随后便可使用培养板。

细胞回收

使用Corning Cell Recovery Solution(Cat. No. 354253)或Corning Dispase(Cat. No. 354235)可以最有效地恢复生长在Corning Matrigel Matrix GFR上的细胞。Corning Cell Recovery Solution在冰上在7小时内将Corning Matrigel Matrix GFR降解，而Corning Dispase是一种金属酶，可以轻柔地释放细胞，从而实现连续培养。

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