【Corning】356231 产品使用说明

基底膜是位于体内细胞下方的薄的细胞基质。Corning Matrigel Matrix Growth Factor Reduced (GFR) Phenol Red Free是从Engelbreth-Holm-Swarm (EHS)小鼠肉瘤中提取的可溶性基底膜制备物，该肿瘤富含细胞外基质蛋白。其主要成分是层粘连素(laminin)，其次是IV型胶原(collagen IV)、肝素硫酸蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycans)、结合蛋白/网素(entactin/nidogen)。Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free还含有TGF-β、表皮生长因子(epidermal growth factor)、胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor)、组织纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator)等自然存在于EHS肿瘤中的生长因子。CorningMatrigel Matrix GFR Phenol Red Free对于正常和转化的依赖固定基底的上皮样细胞的附着和分化都有效。其中包括神经元、肝细胞、Sertoli细胞、鸡晶状体和血管内皮细胞等。Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free会影响成年大鼠肝细胞、血管内皮细胞以及小鼠和人类乳腺上皮细胞的基因表达。它是几种肿瘤细胞侵袭试验的基础，也能支持体内外周神经再生，以及研究血管生成所需的基质。Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free还支持免疫抑制小鼠体内人类肿瘤的扩增。它可用于移植未分选的乳腺细胞，以及嵌入在Corning Matrigel中的分选上皮亚群体。该基质还被用作癌症干细胞模型，并显示能增强体内肿瘤生长速率。

Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free是为那些需要一个纯化和特性化程度超过Corning Matrigel Matrix的重组基底膜制备物而开发的。制备该产品的方法有效地降低了各种生长因子的水平，除了TGF-β可能与胶原IV结合或以潜在形式存在，并在主要成分的纯化过程中分配。该过程保留了主要成分，层粘连素、胶原IV和巢蛋白(nidogen)，同时降低了肝素硫酸蛋白的水平约40-50%。以下表格显示了Corning Matrigel Matrix与典型批次的Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free中生长因子的数值对比。

表 1  356231 产品信息

Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free的解冻步骤如下：将其置于冰中并放入4°C冰箱靠后位置，过夜解冻。一旦Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free解冻，要摇晃瓶子以确保物质均匀分散。始终保持Corning Matrigel Matrix在冰上。使用无菌技术处理。将解冻的CorningMatrigel Matrix GFR Phenol Red Free瓶放在无菌区域，喷洒瓶盖上的70%乙醇并晾干。

Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free可以使用预冷的移液器轻轻吸取，以确保均质性。将Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free分装到管中，当Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free堵塞移液器尖端或导致移液器测量不准确时，更换吸头。如果将凝胶状态的CorningMatrigel Matrix GFR Phenol Red Free放置在4°C的冰中24-48小时，可以将其重新液化。

Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free可以作为薄凝胶层（0.5 mm）使用，细胞可以在其上播种。细胞还可以在Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free中培养，使用1 mm的厚度。过度稀释会导致薄而非凝胶的蛋白质层。这对于细胞附着可能很有用，但在分化研究中可能效果不佳。

注意：Corning Matrigel基质产品的蛋白质浓度是批次特定的，并在分析证书上提供。为了获得一致的结果，请通过计算所需的特定蛋白质浓度（mg/mL）来稀释Corning Matrigel基质产品。为保持凝胶一致性，建议不要将Corning Matrigel基质稀释至低于3 mg/mL。使用预冷的无血清培养基来稀释Corning Matrigel基质。通过上下移液或在冰上旋转小瓶来混合。

薄凝胶法：

●根据推荐方法解冻Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free。使用冷却的吸管，将Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free混合均匀。

●将培养板放在冰上，每平方厘米培养表面加入50 µl的混合液。

●将培养板放置在37°C的细胞培养箱中，孵育30分钟。

●如有必要，在使用前吸去未结合的物质，并用无血清培养基轻轻冲洗（避免吸管的尖端不会刮伤涂层表面）便可使用。

厚凝胶法：

●根据推荐方法解冻Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free。使用冷却的吸管，将Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free混合均匀。

●将培养板放在冰上。将细胞加入Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free中，并使用冷却的吸管悬浮，每平方厘米培养表面加入150-200 µl。

●将培养板放置在37°C的细胞培养箱中，孵育30分钟后添加培养基。细胞也可以在这个凝胶上培养。

薄涂层法：

● 根据推荐方法解冻Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free。使用冷却的吸管，将Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free混合均匀。

●使用无血清培养基稀释Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free至所需浓度。应进行预实验以确定适用的最佳涂层浓度。

●将稀释后的Corning Matrigel Matrix GFR Phenol Red Free加入要涂层的容器中。数量应足够覆盖整个生长表面。在室温下孵育一小时。

●吸去未结合的物质，并使用无血清培养基轻轻冲洗，随后便可使用培养板。