【Corning】354250 细胞滴培养方案
（Corning® PuraMatrix™ Peptide Hydrogel）
（354250）
Corning® PuraMatrix™ Peptide Hydrogel (CorningPuraMatrix) 是一种用于创建定义的三维微环境的合成基质，可用于各种细胞培养实验。为了实现最佳的细胞生长和分化，需要确定该材料和生物活性分子（例如生长因子、细胞外基质（ECM）蛋白和/或其他分子）的适当混合比例。CorningPuraMatrix由标准氨基酸（1% w/v）和99%水组成。在生理条件下，CorningPuraMatrix的肽组分自组装成为具有 nm级纤维结构的3D水凝胶，平均孔径为50-200 nm。该水凝胶可以方便地在培养皿、多孔板或细胞培养插入物中形成。
CorningPuraMatrix除了可以提供3D细胞培养，还能够进行更简单的2D培养。许多细胞类型在CorningPuraMatrix表面培养时形成适当的3D形态，与细胞夹心培养系统相比，简化了开发3D体外模型系统所需的工作。研究表明，与2D培养的细胞相比，形成3D结构的细胞更接近其体内对应物。CorningPuraMatrix允许定义的微环境更好地再现体内环境，从而提高在高通量环境中进行的实验所得结果的预测质量。
研究表明，CorningPuraMatrix支持肝祖细胞、大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PC12）和海马神经元的分化，同时促进内皮细胞的管状生成。研究还表明，CorningPuraMatrix支持各种原代细胞（例如神经元、成纤维细胞和角质形成细胞）和转化细胞（例如MG-63、SH-SY5Y、HEK293和NIH3T3）的附着。其他潜在的应用包括干细胞增殖和分化、肿瘤细胞迁移以及组织再生的体内分析。CorningPuraMatrix具有生物相容性、可吸收性，并且不含动物来源的材料和病原体。对于动物体内研究，可将可溶性材料注射到体内，随后在与生理环境接触时形成3D水凝胶。
表 1 PuraMatrix™ Peptide Hydrogel 354250产品信息
细胞滴培养方案
这种技术允许在Corning PuraMatrixPeptide Hydrogel中封装细胞形成小颗粒，可用作用Corning PuraMatrixPeptide Hydrogel封装感兴趣的细胞类型的合适条件的快速筛选（有或无ECM蛋白的情况下）。细胞滴培养方案还可用于快速评估封装在Corning PuraMatrixPeptide Hydrogel中的细胞的活性、形态和/或免疫染色。
① 通过涡旋或在浴式超声波装置中超声处理Corning PuraMatrixPeptide Hydrogel原液（1％w/v），每次使用原液时超声处理30分钟以降低粘度。如果有气泡存在，可将一部分原液在1.5毫升EP管中高速离心。
② 在EP管中用无菌的20％蔗糖稀释原液，以生成10％蔗糖中所需最终浓度为2倍的Corning PuraMatrixPeptide Hydrogel溶液。轻柔地用移液管混合。
③ 使用标准程序将细胞培养至75-80％的密度，并收集细胞。
④ 如果要向细胞滴中添加ECM蛋白，按照ECM补充方案的描述进行准备。最终盐浓度应为1毫摩，以防止Corning PuraMatrixPeptide Hydrogel凝胶化。
⑤ 以1000 × g轻柔离心细胞，用5毫升10％蔗糖（经过过滤灭菌，0.2微米滤器）洗涤，重新离心，然后用10％蔗糖重悬至所需最终浓度的2倍（通常为5×105-1×106个细胞/毫升）。在此步骤中，将ECM蛋白混合至2倍最终浓度。使用轻柔的移液操作混合样品。
⑥ 将细胞/蔗糖悬浮液与等体积的Corning PuraMatrixPeptide Hydrogel混合，并使用轻柔的移液操作混合。将15微升细胞/水凝胶混合物沿着培养基表面的孔侧面滴入孔中（1毫升完整培养基），这将启动水凝胶的组装。可以在含有培养基的孔中滴入多个“液滴”。
⑦ 在所需的培养时间后，可以使用LIVE/DEAD（活力/细胞毒性）分析试剂盒（Molecular Probes Cat. No. L-3224）分析液滴培养的细胞存活性。使用刮刀从培养基表面收集细胞/凝胶颗粒。将颗粒样品放置在玻璃载玻片上，然后加入50微升LIVE/DEAD Calcein AM和EthD-1溶液。
⑧ 在室温下孵育载玻片30分钟，然后使用成像显微镜观察绿色（活细胞）和红色（死细胞）细胞的存在。
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