【Corning】354250 （Corning® PuraMatrix™ Peptide Hydrogel）产品使用说明

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Corning 细胞外基质 ECM 生物涂层 Biological Coatings Matrigel Matrix Cell-Tak 细胞和组织粘附剂产品胶原蛋白 Collagen 层粘连蛋白 Laminin PuraMatrix BioCoat Poly-D-Lysine Fibronectin Synthemax vitronectin substrate 354250

（Corning® PuraMatrix™ Peptide Hydrogel）

（354250）

Corning® PuraMatrix™ Peptide Hydrogel (CorningPuraMatrix) 是一种用于创建定义的三维微环境的合成基质，可用于各种细胞培养实验。为了实现最佳的细胞生长和分化，需要确定该材料和生物活性分子（例如生长因子、细胞外基质（ECM）蛋白和/或其他分子）的适当混合比例。CorningPuraMatrix由标准氨基酸（1% w/v）和99%水组成。在生理条件下，CorningPuraMatrix的肽组分自组装成为具有 nm级纤维结构的3D水凝胶，平均孔径为50-200 nm。该水凝胶可以方便地在培养皿、多孔板或细胞培养插入物中形成。

CorningPuraMatrix除了可以提供3D细胞培养，还能够进行更简单的2D培养。许多细胞类型在CorningPuraMatrix表面培养时形成适当的3D形态，与细胞夹心培养系统相比，简化了开发3D体外模型系统所需的工作。研究表明，与2D培养的细胞相比，形成3D结构的细胞更接近其体内对应物。CorningPuraMatrix允许定义的微环境更好地再现体内环境，从而提高在高通量环境中进行的实验所得结果的预测质量。

研究表明，CorningPuraMatrix支持肝祖细胞、大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PC12）和海马神经元的分化，同时促进内皮细胞的管状生成。研究还表明，CorningPuraMatrix支持各种原代细胞（例如神经元、成纤维细胞和角质形成细胞）和转化细胞（例如MG-63、SH-SY5Y、HEK293和NIH3T3）的附着。其他潜在的应用包括干细胞增殖和分化、肿瘤细胞迁移以及组织再生的体内分析。CorningPuraMatrix具有生物相容性、可吸收性，并且不含动物来源的材料和病原体。对于动物体内研究，可将可溶性材料注射到体内，随后在与生理环境接触时形成3D水凝胶。

表 PuraMatrix™ Peptide Hydrogel 354250产品信息

补充/可选材料（未提供）：感兴趣的细胞的组织培养基蒸馏水中的20%蔗糖，经无菌过滤（用无菌水稀释制备10%蔗糖储备液）细胞外基质（ECM）、生长因子和细胞因子 Falcon®细胞培养插入物和Falcon细胞培养

PuraMatrix Peptide Hydrogel的最佳结果提示

注意事项：

凝胶化：由于该材料的凝胶化是由1 mM盐浓度引起的，因此盐含量较高的缓冲液和培养基可能会促进凝胶化。因此，在希望凝胶化之前，请不要将CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel与含盐的缓冲液和/或培养基混合。一旦凝胶形成，任何后续的样品混合都会破坏水凝胶的结构。

粘度：每次使用储备液（1%重量/体积）时，通过涡旋混合或在浴式超声波清洗器中进行超声处理30分钟，降低储备液的粘度。如果存在气泡，将储备液进行高速离心。

pH和渗透压：由于CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel的pH值为2-2.5，在进行细胞封装实验时，尽量缩短细胞与材料接触的时间，直到添加培养基。将等渗蔗糖添加到细胞悬液以及CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel中，将有助于保护细胞，直到pH通过与组织培养基平衡而恢复正常。有关详细信息，请参阅D和E部分（细胞封装方案）。

操作注意事项

● 由于CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel形成相对柔软的纤维状基质，在进行培养基更换时需要非常小心处理材料。不要使用真空吸引将培养基从水凝胶上方去除。避免直接接触水凝胶。

● 当向样品中添加培养基和/或其他组分时，将移液枪头端放置在培养容器壁的顶部。

●当使用表面积较大的培养容器（例如，35毫米培养皿）时，务必非常小心地进行液体处理步骤，以避免破坏水凝胶。请参考第15页的表格，确定所需渗透支持（细胞培养插件）或多孔板规格的适当体积。

● CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel可以以浓度为1%（重量/体积）的未稀释形式使用，也可以按照使用程序中的描述进行稀释。对于许多应用，低于0.5%的浓度是合适的。例如，建议使用0.25%进行大多数细胞类型的表面培养，以及使用0.15%的最终浓度封装神经元和内皮细胞。

●要向水凝胶中添加ECMs、生长因子和/或其他生物活性分子，请参阅“ECM补充物制备”方案。

●如果使用无血清培养基培养细胞，则可能需要通过胰蛋白酶消化来停止胰蛋白酶消化后的细胞分离。

重要提示：为了实现最佳的细胞生长和分化，有必要确定CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel和生物活性分子（如生长因子、ECM蛋白和/或其他分子）的适当混合比例。一般而言，对于大多数应用，将生长因子添加到培养基中而不是封装到水凝胶中可能更好。

细胞培养板中CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel的推荐使用体积如下

注意：用于播种（CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel/细胞/蔗糖混合物）的CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel的终体积应该加倍，以进行细胞封装。

细胞培养板中表面种植贴壁细胞的操作方法

注意：许多播种在CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel上的细胞类型可以呈现适当且预期的3D结构（例如，肝细胞球、胚胎干细胞集落和胚胎体、神经细胞的分枝）。2D表面播种方法是筛选任何给定细胞类型的形态和功能特征的理想方式。

CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel的制备和凝胶形成

●通过涡旋混合或在浴式超声波清洗器中超声处理，降低CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel储备液（1%重量/体积）的粘度。用无菌蒸馏水将适量的CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel储备液稀释在无菌离心管中。

● 通过用无菌蒸馏水稀释，准备足够体积所需浓度的CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel溶液（例如，24孔板为250 µl或96孔板为50 µl）。加到孔的表面，并通过小心缓慢地向每个孔中加入培养基（例如，24孔板为500 µl或96孔板为100 µl）促进凝胶形成。

●将培养皿放入细胞培养箱中，孵育30-60分钟，使CorningPuraMatrix Peptide Hydroge形成凝胶。对于较高浓度的水凝胶，30分钟足够；对于0.15-0.25%的水凝胶，最好进行1小时的平衡。水凝胶组装完成后，按照操作注意事项说明小心更换培养基。在1小时内更换培养基两次，使生长环境平衡到生理pH值。如果需要，在最后一次培养基更换后，平衡样品可以在37ºC下过夜储存。

细胞播种

用胰蛋白酶消化细胞，离心得到所需数量（通常对于大多数细胞类型，最终细胞密度为4~16×104 cells/cm²）。将细胞悬浮于适量的组织培养基中，最终体积为200-350 µl。小心地将细胞悬浮液加到水凝胶的顶部。

细胞培养插件中表面种植贴壁细胞的操作方法

以下步骤基于使用Falcon® 24孔细胞培养插件（目录号353095）和Falcon细胞培养插件伴侣板（目录号353504）。

其他细胞品类