【Cytiva】适用于 Vero 细胞的 Hyclone™ VaccineXpress 细胞培养基
Hyclone™ VaccineXpress 细胞培养基专为高密度生长和维持肾衍生细胞系 ( 例如 Vero 细胞 ) 而设计和开发，用于病毒疫苗生产。
VaccineXpress 不含血清 (SF)、动物源性成分 (ADCF) 和人类源性成分。这种培养基已被证明可以用微载体培养依赖附着的 Vero 细胞，用于生产流感、寨卡病毒、登革热和呼吸道合胞病毒 (RSV) 等疫苗。
培养基中缺乏血清和动物源性成分降低了工艺的可变性。它还增强了 BioProcess 应用中纯化重组蛋白和病毒的可扩展性和简易性。
VaccineXpress 的配方不含 L- 谷氨酰胺，可延长保质期。它有多种规格，包括液体和粉末形式 ( 图 1 )。
VaccineXpress 培养基非常适合从平面培养介质转移到 WAVE Bioreactor™ 或 Xcellerex™ 生物反应器中的大规模微载体培养物的应用。
VaccineXpress 培养基的主要特征
• SF、ADCF
• 旨在支持高细胞密度、在高病毒滴度方面表现更优
• 允许直接或间接驯化适应
• 旨在支持微载体培养
• 提供液体和粉末形式
• 适用于小规模和大规模培养应用
图 1. VaccineXpress 细胞培养基能够以液体或粉末形式提供，包装尺寸适合小体积细胞培养和大规模生物加工应用。
规格 | |
液体培养基 • 含碳酸氢钠 • 不含 L- 谷氨酰胺 • 不含泊洛沙姆 188 • 不含酚红 | 粉末培养基 • 不含碳酸氢钠 • 不含 L- 谷氨酰胺 • 不含泊洛沙姆 188 • 不含酚红 |
产品处理
该培养基 ( 粉末和液体形式 ) 应储存在 2℃ 至 8℃ 的温度下，远离光线。
建议制备
液体培养基
添加 L- 谷氨酰胺后，液体培养基可以立即使用。加入无菌过滤的 L- 谷氨酰胺。我们建议最终浓度为 4 mM。
粉末培养基
1. 加入量为最终制备体积 80% 的细胞培养级用水，在搅拌的同时，将 11.65 g/L 粉末培养基加入到细胞培养级水中。因为水源通常是冷水，调节水温会有用。使用较暖的室温水 ( 20℃ 至 25℃ )将改善溶解时间。混合 10 到 15 分钟或直到溶解。
2. 加入碳酸氢钠 (2.0 g/L)，混合直至溶解。根据需要，用 HCl 或NaOH 调节至 pH 7.0–7.2。
3.用细胞培养级水将容器调节至最终体积。让溶液再混合 15 分钟。
4. 检查 pH 和渗透压，必要时进行调整。期望值：
• pH 7.0–7.2
• 渗透压 280–310 mOsm/kg
5. 通过 0.22 µm 的无菌过滤器将培养基过滤到所需的容器中。
制备说明
如果培养基是短期储存的，可以在步骤 2 中加入 L- 谷氨酰胺 ( 最终浓度为 4 mM )。对于更长的储存时间，我们建议在培养时加入 L-谷氨酰胺。水合后，不含 L- 谷氨酰胺的培养基可在 2℃ 至 8℃ 的温度下避光保存 6 个月。
一般培养建议
1. 在 37℃ 和 5% CO2 环境中孵育培养物。
2. 通过使传代细胞处于对数生长期来维持驯化的细胞。
3. 我们建议以 3~5 × 104 cells/cm2 的密度接种细胞；细胞活率应该> 90%。
4. 为了保持完全无血清和无动物源的工艺，我们建议使用重组胰蛋白酶 ( 例如 Sheffield™ rTrypsin ACF )。
5. 详述细胞分离程序超出了本文件的范围。使用标准技术。请注意，如果使用胰蛋白酶，无血清条件下必须使用胰蛋白酶抑制剂、细胞洗涤步骤或一次 ( 或多次 ) 培养基更换。
微载体培养的注意事项
已经对 VaccineXpress 进行了广泛的测试，以在 Cytiva 的 Cytodex™ I Gamma 微载体上培养细胞。很有可能与其他类型的微载体兼容，但尚未进行评估。
当使用任何类型的微载体时，我们建议添加 2.0 g/L 泊洛沙姆 188作为剪切保护剂。
如同正常的无血清静态培养一样，使用胰蛋白酶进行分离需要用大豆胰蛋白酶抑制剂 (STI) 进行中和。残留的胰蛋白酶会对细胞培养产生负面影响，但残留的 STI 也会产生负面影响。大多数 STI 制造商建议使用与所用胰蛋白酶等体积 ( 1 mg/mL 溶液 ) 的溶液，这在静态培养中效果很好，在静态培养中，所有 STI 都可以轻松去除。然而，在微载体培养中，我们建议使用较少的 STI ( 体积比为 1:5而不是 1:1 )，因为很难完全去除它。
直接驯化适应 *
1. 将在当前培养基中生长的细胞以 5.0×104 cells/cm2 的密度直接转移到 VaccineXpress 培养基中。
2. 当细胞密度达到约 80% 融合时，分离细胞并在 VaccineXpress培养基中传代培养，并继续进行两次传代。
3. 细胞应在融合的基础上进行传代培养，通常为 72 至 96 小时。
4. 直接适应一般用这种培养基效果很好；如有必要，转到间接驯化适应。
间接驯化适应 *
培养基制备：将当前使用的培养基与等体积的 VaccineXpress 培养基混合。这构成了原始培养基和新培养基比例为 50:50 的混合体。
1. 保持一个具有当前可接受增长率的储瓶。如果对新培养基的适应停滞不前，或者下降到不可接受的增长率，在当前条件下，再重复一次或两次。
2. 以 3–5×104 cells/cm2 的接种浓度将细胞传代培养到混合物中。为了获得最佳结果，培养物对于粘附的 Vero 细胞应该是大约80% 的融合，并且细胞活率应该 > 90%。
3. 当细胞达到约 80% 的融合密度时，以 3–5×104 cells/cm2 的接种密度传代培养至原始培养基和新鲜 Hyclone™ 培养基 ( 原始培养基与新培养基的比例为 25:75 ) 的另一混合物中。
4. 继续传代，降低原始培养基的浓度，增加新培养基的浓度。在原始培养基在混合物中的浓度达到 12.5% 后，切换到直接VaccineXpress 培养基应该可行。一般来说，细胞会在 3 到 4 代内适应 ( 我们建议至少 6 次群体倍增 )。
*这些程序假设细胞已经适应无血清培养基。从含血清培养基中适应可能需要额外的时间和注意力。
细胞冻存
有几种细胞冻存和复苏方案；请遵循内部推荐的程序。适应的细胞可以在含 10% DMSO 的 VaccineXpress 培养基中冷冻保存。我们建议以 1×107 cells/mL 的最小细胞密度冻存细胞。
质量控制测试
质量控制测试规范列于下表。
表 测试规范1
液体培养基
外观 | 透明溶液 |
渗透压 | 280 到 310 mOsm/kg |
pH | 7.0 至 7.2 |
无菌 | 无生长 ( 细菌或真菌 ) |
内毒素 | < 1 EU/mL |
粉末培养基
外观 | 灰白色粉末 |
内毒素 | < 10 EU/g |
促进增长 | 传代 |
订购信息
VaccineXpress 培养基以最高 10,000 升的均质液体批量和最高250,000 升的粉末批量生产。
Hyclone™ VaccineXpress 粉末培养基*
包装尺寸 | 产品代码 |
10 L ( HDPE 瓶 ) | SH31127.01† |
50 L ( HDPE 瓶 ) | SH31127.02‡ |
100 L ( HDPE 瓶 ) | SH31127.03‡ |
500 L ( 塑料袋/桶 ) | SH31127.04‡ |
Hyclone™ VaccineXpress液体培养基
包装尺寸 | 产品代码 |
1000 mL ( PETE 瓶 ) | SH31126.01† |
10 L ( bioprocess 容器 ) | SH31126.02‡ |
20 L ( bioprocess 容器 ) | SH31126.03‡ |
50 L ( bioprocess 容器 ) | SH31126.04‡ |
100 L ( bioprocess 容器 ) | SH31126.05‡ |
产品描述 | 货号 | 规格 |
左旋谷氨酰胺 200mM | 100 mL 瓶 | SH30034.01† |
左旋谷氨酰胺 200mM | 500 mL 瓶 | SH30034.02† |
左旋谷氨酰胺粉末 | 500 g | SH30336.03‡ |
* 包装中的粉末足以使液体培养基的体积等于标签上标明的体积。
† 库存物品。
‡ 物品定制生产。订货交付时间和最小订单数量适用。
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