【Cytiva】化学发光中的标记物纯化

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Cytiva SephadexTm G-10 Sephadex G-15 Superdex AKTA pure 17140801 17508701 17508702 17003101 17003201 17003301 17002001 17001001 28990944 29148721 28989335 28989333 28989334 29321905 29321906

化学发光免疫分析中，根据发光平台的不同，需要对抗原或抗体等分子进行基于不同平台的标记，如直接发光法通常标记吖淀醋、ABEI 等小分子化合物，酶促发光平台通常标记辣根过氧化物酶(HRP) 或碱性磷酸酶(AP) 等,而电化学发光平台则需要标记三联吡啶钌等分子。

在标记完成之后，标记产物的分离纯化非常重要，分离纯化可将游离的标记物或游离的抗原/抗体，以及可能存在的不同的标记物形式进行去除，从而只保留比较均一的抗原/抗体标记物。从而达到尽可能降低分析过程中的检测本底并避免出现假阳性问题，同时保证试剂的批间差最小化，保证试剂的稳定性。

使用凝胶过滤层析(SEC) 进行标记物纯化

凝胶过滤层析根据生物分子大小及形状对其进行分离，样品加入凝胶过滤层析柱之后，在层析柱上进行分离,大分子先洗脱,小分子后洗脱。

高自动化: 配合设备使用,可全自动完成多个样品的纯化过程,节省时间和人力成本

优重复性:层析方法可重复性好，纯化方法一旦确定，可保证不同批次纯化效果一致，从而保证试剂的批间差最小化

全数据记录:整个实验过程的数据可被完整的记录。保证原料生产过程的可追溯性。

图: 凝胶过滤层析(SEC) 示意图

小分子标记物纯化

●以吖啶酯、ABEI、三联吡啶钌等分子为标记物

●标记物分子量较小

●标记物与被标记的抗原/抗体分子量相差较大

●使用 Desalting 脱盐柱进行纯化

图:使用 HiTrap"Desalting 柱进行脱盐实验。其中蓝色为蛋白紫外吸收峰(标记物纯化中此处为标记了小分子的抗原/抗体),红色为 NaCI 电导峰(标记物纯化中此处为游离的小分子标记物 )。

小分子标记物纯化

●常用 Desalting 脱盐柱可满足绝大部分小分子标记物的纯化，对于特别的分子量较小的被标记物(如多等)的标记后纯化,可选择 SephadexTm G-10、Sephadex G-15 等填料。

●根据上样体积不超过柱体积的 25% 的标准选择合适体积的脱盐柱。

图：不同规格的Desalting 脱盐柱

大分子标记物纯化

●以辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶等为标记物

●标记物分子量较大

●标记物通常与被标记物分子量相差较小

●使用高分辨凝胶过滤(Superdex^Tm 系列凝胶过滤层析柱)进行纯化

图: 使用 Superdex 200 ncrease 10/300 GL蛋白分离结果图

选择合适的高分辨凝胶过滤层析柱

●Superdex 200 系列填料可对分子量 10-600KDa 范围内的分子进行有效的分离,广泛的应用于抗原/抗体酶标记后的标记物分离纯化。对于分子量较小的抗原(小于 30KDa)进行酶标记后，如果需要对游离的抗原进行去除，可以使用 Superdex 75 系列(可对分子量 3-70KDa 范围内的分子进行分离)填料进行分离

●根据上样体积约为 2-3% 柱体积的标准选择合适体积的高分辨凝胶过滤层析柱

图:不同规格的高分辨凝胶过滤层析柱及其推荐上样体积

使用AKTA^TM pure 层析系统进行全自动的标记物纯化

AKTA pure 层析系统是一款灵活和直观的全自动层析系统。可用于快速纯化从微克到克水平的目标产物。同时 AKTA pure 是一台可靠的系统，它的硬件以及 UNICORNM软件与各种层析柱和填料一起可满足任何纯化挑战。

AKTA pure 主要性能特点:

●模块化设置，可根据需求灵活配置系统,兼容所有的纯化技术尺寸实用,可根据需要放置在试验台上或层析冷柜中

●两款不同型号设备(AKTA pure 25 和 AKTA pure 150) 满足不同规模的纯化需求

●软件界面友好,流路直观,操作简便

●软件符合 FDA 21CFR Part 11 对数据完整性要求，具有多级权限管理、审计追踪、电子签名等功能

AKTA pure 层析系统

订购信息

Desalting 脱盐柱系列

产品	产品代码
HiTrap Desalting 5x5 mL (Sephadex G-25 SF)	17140801
HiPrepTm Desalting 1x53 ml (Sephadex G-25 F)	17508701
HiPrep Desalting 4x53 mL (Sephadex G-25 F)	17508702
Sephadex G-25 Superfine 100g	17003101
Sephadex G-25 Fine 100g	17003201
Sephadex G-25 Medium 100g	17003301
Sephadex G-15 100g	17002001
Sephadex G-10 100g	17001001

高分辨凝胶过滤系列

产品	产品代码
Superdex 200 Increase 10/300 GL	28990944
Superdex 75 Increase 10/300 GL	29148721
HiLoadTM 16/600 Superdex 200 pg	28989335
HiLoad 16/600 Superdex 75 pg	28989333
HiLoad 26/600 Superdex 75 pg	28989334
Superdex 200 Increase HiScaleTm 16/40,40 cm*	29321905
Superdex 200 Increase HiScale 26/40,40 cm*	29321906