【Cytiva】Capto™ Lentil Lectin亲和层析

Capto™ Lentil Lectin 是一种配基为扁豆凝集素的亲和层析填料，用于纯化糖蛋白和其他含有α-甘露糖和α-D-葡萄糖等基团的糖类。该产品基于高流速琼脂糖基架，能够提供高流速的运行。Capto™Lentil Lectin能以大包装形式获取，也能以用于高通量工艺开发的其他不同形式获取（图 1）。

Capto™ Lentil Lectin 的主要特征包括：

• 族特异性亲和捕获含糖类基团分子

• 在下游纯化中，生产效率高，成本效益高

• 不含动物成分

• 供应安全与监管支持

图1 Capto™ Lentil Lectin 在不含动物成分的环境中生产，且涵盖在我们的供应安全计划中

凝集素是一种可与某些糖类残基相互作用的蛋白质，而这种相互作用具有特异性及可逆性。固化凝集素是分离糖蛋白、糖脂、多糖、亚细胞颗粒以及纯化去污剂溶解细胞膜成分的有效工具。凝集素还可用于评估细胞发育过程中以及恶性或病毒转化细胞变异体中，表面糖蛋白水平或组成的变化。

Capto™ Lentil Lectin 填料是通过将扁豆凝集素偶联到 N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 活化的高流速琼脂糖基质上形成（图 2）。扁豆凝集素是一种从小扁豆（扁豆）种子中分离出来的金属蛋白，可与含有α-D-甘露糖、α-D-葡萄糖或空间相关残基的分子结合。为保持Capto™ Lentil Lectin的结合特性，Mn²⁺和 Ca²⁺必须同时存在。这些离子过量存在于推荐的储存溶液中。虽然在没有游离金属离子的情况下，凝集素-金属离子络合物也可在中性 pH 下保持活性和稳定。

但是若想在 pH < 5 时保持填料的结合活性，缓冲溶液中应存在过量的 Mn²⁺ 和 Ca²⁺ (1mM)。Capto™ Lentil Lectin填料的主要特性总结请参见表 1 。

* d50v 是累积体积分布的中值粒径。

† 在 pH=7.0 的 0.1 M 磷酸盐缓冲液中测定的静态结合能力。

‡ pH 值区间，在该区间内进行在位清洗将不会显著改变填料性能。

§ 在 20 cm 柱高， 20°C 的水测定时，Capto™Lentil Lectin 的最大推荐运行速度为300 cm/h。运行压力小于 2 bar。

结合

糖蛋白和其他含糖类的分子与 Capto™ Lentil Lectin的结合是在Mn²⁺ 和 Ca²⁺ 同时存在的中性 pH 条件下进行。这些离子过量存在于提供的填料保存溶液中。即使在没有游离金属离子的情况下，蛋白质-金属离子络合物也可在中性 pH 条件下保持活性和稳定。但是若要保持 pH < 5 条件下的结合活性，则需要过量的 Mn²⁺ 和 Ca²⁺ (1 mM)存在。推荐的结合缓冲液是 20 mM Tris-HCl, pH 7.4，不超过 0.5MNaCl，以避免非特异性离子相互作用。

洗脱

结合物质的洗脱可使用梯度（连续或阶梯）增加的 α-D-甲基甘露糖苷或 α-D-甲基葡糖苷实现。这些碳水化合物可作为强洗脱液，许多物质可在0.1至0.2M的条件下洗脱。但对于更紧密结合的物质，可能需要更高浓度。也可使用葡萄糖和甘露糖作为洗脱液，但洗脱力较弱。也可使用低 pH（在运行范围内）或 pH=6.5 的 0.1M 硼酸盐缓冲液洗脱强结合物质。可通过在洗脱缓冲液中加入1％脱氧胆酸盐或其他洗涤剂以促进强结合物质的洗脱。

再生

Capto™ Lentil Lectin 的再生条件是用含 0.5 M NaCl 的 pH 8.5 和pH5.5的两种缓冲溶液交替淋洗2~3个CV。交替淋洗重复进行三次，然后用3~5个CV的结合缓冲液重新平衡。再生过程中强结合物质可能不会都被洗脱下来，这种情况下，可以使用含 0.1％ 非离子去垢剂的硼酸盐缓冲液进行低流速清洗。也可使用 20％ 乙醇或高达 50％ 的乙二醇梯度洗涤液来洗脱强结合物质。

另一种再生方法，可用洗涤剂溶液（例如 0.1％ Triton™ X-100）在37°C条件下淋洗 1 分钟。再生后，至少用 5 个CV的结合缓冲液进行重新平衡。

化学稳定性

在 40°C 下，在不同 pH 的缓冲液中储存一周后，通过总有机碳/氮(TOC/TN) 泄漏分析测定 Capto™ Lentil Lectin 的化学稳定性（图 3）。

结果表明，Capto™ Lentil Lectin 在 pH 3 至 10 之间稳定。在 pH < 3或 pH > 10 时，碳氮泄漏量增加。

图 3.当在 40°C 下在不同 pH 中储存一周时，Capto™ Lentil Lectin中的碳和氮相对损失率

在层析运行前通常会采用NaOH对设备和管道进行在位清洗和在位消毒。如果在设备和管道中残留NaOH，接触到含有 Mncl₂ 或 Cacl₂ 的缓冲液，Mn(OH)₂可能会使溶液沉淀或褪色。若多种物质长期累积，可能会导致填料的载量下降，背压增加。因此，在连接层析柱和使用含 1mM Mncl₂ 或 Cacl₂ 溶液之前，将设备和管道中的 NaOH 彻底清除至关重要。其中一个方法是，在加入含 MnCl₂或 CaCl₂ 溶液前，可采用一个可中和残留 NaOH 的溶液润洗系统。另外，为避免 Mn(OH)₂ 造成的沉淀和褪色，在加入 MnCl₂ 前使用 NaOH 去增加溶液的 pH 也非常重要。

储存

Capto™ Lentil Lectin 保存条件是 20％ 乙醇（含150 mM NaCl、1 mM CaCl₂ 和 1 mM MnCl₂）。建议在 2°C 至 8°C 下储存于贮存液中。