【Cytiva】WB样本制备之样本清除

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Cytiva 28941279 28944045 80648356 28932235 28932248 28932317 28932361 80648470 80648451 80620958 80620426 80621034 11001341 80621186 11001342 80641877 80641896 80647957 RPN755E RPN756E RPN800E RPN810 RPN850E RPN851E 17044601 17061501 29030735 10600002 106

通常不必在1-D凝胶电泳之前对样品进行处理。然而，如果存在分离的问题，例如模糊带，则样品清除通过去除潜在干扰化合物如核酸、多糖和盐来提高纯化率。例如，DNA酶的添加用于对抗由核酸释放引起的粘度的问题。

表1提供了常见污染物的清单和处理它们的选项

表1

样品清洁产品

SDS-PAGE清洁试剂盒：用于制备由于存在盐或低蛋白质浓度而难以分析的样品（图1.1）。该试剂盒使用沉淀剂和共沉淀剂的组合来定量沉淀样品蛋白，同时在溶液中去除诸如洗涤剂、盐、脂类、酚类和核酸等干扰物质。蛋白质通过离心成球。将颗粒进一步清洗以去除非蛋白质污染物，然后再次离心分离。将所得颗粒重新悬浮，与SDS样品缓冲液混合用于聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），并加热。然后样本就可以用于SDS-PAGE了。该程序可在2小时内完成。

图1.1 SDS-PAGE清洗试剂盒与乙醇沉淀法的比较

（a）用10体积乙醇沉淀尿蛋白。

（b）SDS-PAGE清除试剂盒沉淀尿蛋白。使用后发现更多更强的条带。SDS-PAGE清理试剂盒由于有效的沉淀过程，试剂盒是基于凝胶：8×9厘米，丙烯酰胺12.5%，SDS 0.1%，在SE260微型垂直电泳运行。染色：考马斯蓝R 250。

2-D清洁试剂盒设计用于制备2-D凝胶电泳样品（图1.2），但也可用于Western印迹应用。试剂在溶液中定量蛋白质产物，同时去除干扰物质，如洗涤剂、盐、脂类、酚类和核酸。用2-D清洗试剂盒对样品进行处理，大大提高了2-D凝胶电泳结果的质量，减少了条纹、背景染色和其他假性结果。有关2-D清理试剂盒的更多信息，请参见GE（2）的二维电泳、原理和方法手册。

图1.2。2-D清洁试剂盒消除了大部分残留SDS引起的水平条纹。样品：用4% SDS，40毫米TrIS碱提取大鼠肝脏。第一向：大约20μg的大鼠肝脏蛋白，固定的胶条（pH 4～7, 7厘米）。EtTon®IPGPHOR 3等电聚焦电泳17.5 kVH。第二向：SDS-PAGE（12.5%），运行在SE 260垂直电泳（8×9厘米凝胶）上运行。染色：银染色试剂盒，蛋白质。

血清或血浆样品中高丰度蛋白背景降低

当用Western印迹法研究血浆或血清时，大量的血浆蛋白，如白蛋白和IgG可以掩盖蛋白质含量较低的信号。预填充柱如HITRAPμ白蛋白和IgG等填料被设计为这些潜在的有问题蛋白质的样品，分别可去除95%白蛋白和＞90% IgG。

HITRAP白蛋白和IgG纯化1 mL柱设计为从约150μl未稀释的人血浆或血清样品中除去白蛋白和IgG，其含有正常的白蛋白水平（～40 mg/ml）和IgG（～15 mg/ml）。纯化过程需要大约35分钟，并且可以使用来自Sou-KTA平台、蠕动泵或手动与注射器的液相色谱系统来执行。当使用较小体积时，推荐白蛋白和IgG纯化SPInAPP，设计用于体积为50μL的人血浆或血清。

脱盐和样品浓缩

在将样品应用于电泳凝胶之前，溶剂不含有过量的盐或其他低分子量污染物非常重要。样品中的高盐水平会导致蛋白质迁移不一致和不可预知的其它问题。脱盐是在凝胶过滤的基础上实现的，同时将样品转移到所需的缓冲液中。然而，脱盐和缓冲交换过程常常导致样品稀释。所以在电泳应用中，需要很高的样品浓度以获得良好的结果，样品浓度需要提高。通过膜超滤可有效地富集样品。

由GE提供的脱盐和浓缩柱总结在表3中。

表3 GE的脱盐产品