【Merck】IHC高背景的原因和解决方案

浏览量：110

Merck

Merck IHC

1. 抗体使用浓度过高

参考抗体说明书中的建议稀释比进行实验。如果背景还是较高，可以适当提高抗体稀释比例。

2. 样本内源性过氧化物酶或碱性磷酸酶干扰

使用常见酶标二抗底物（过氧化物底物 DAB，碱性磷酸酶底物 NBT/BCIP）进行化学显色时，样本中内源性过氧化物酶或碱性磷酸酶可能造成高背景信号。

对于过氧化物酶，可以使用 3%H₂O₂ 溶液在室温下处理样本 10-15min。

对于碱性磷酸酶，在显色底物中加入 1mM 左旋咪唑可以抑制内源性碱性磷酸酶。

3. 二抗与样本非特异结合

使用与二抗物种来源相同的血清来对样本进行封闭处理。比如，如果二抗是山羊来源，使用 10%正常山羊血清进行封闭。

4. 一抗与样本物种来源相同

当一抗物种来源于检测样本物种相同时，样本中内源 IgG 可能会被二抗检测到导致高背景，比如常见的使用小鼠一抗检测小鼠样本（mouse-on-mouse IHC）。

可以在封闭步骤中，使用未标记的 anti-mouse IgG Fab 段抗体对内源 IgG 进行封闭。

5. 组织没有充分清洗

在抗体孵育和显色步骤后，用 1xPBS 溶液至少清洗 3 次，每次 2-5min。

6. 组织在组化过程中变干燥

整个 IHC 实验过程需在湿盒中进行，避免样本干燥。

其他细胞品类

别划走，精彩继续

长按识别

添加一对一专属技术支持

扫码进群

咨询详细产品信息

重点品牌

ATCC｜CELLNTEC｜Cytiva｜Lonza｜PromoCell｜ScienCell｜Serumwerk

品牌名录

A-D

Abiel｜ACCEGEN｜ Advanced BioMatrix｜Advanced instruments｜BERLIN｜ALSTEM｜alveole｜Atlantis Bioscience｜Cell Biologics｜Cellendes｜Cellenion｜Cellero｜Cell Microsystems｜cells-online｜Cellutron｜Celprogen｜CelVivo｜CLS｜Codex Biosolutions｜Coriell｜Corning｜CYTENA｜Cytosurge｜DefiniGEN｜Develco｜DISPENDIX ｜DSMZ

E-N

Elixirgen Scientific ｜Epithelix｜ESIBIO｜GeneFrontier｜Glow Biologics｜HumanCells Bio｜IBA-lifesciences｜iBiochips｜IBI Scientific｜Innoprot｜iO BiO Science｜Iprasense｜iQ Biosciences｜IsoPlexis｜Leica｜Lifeline Cell Technology｜Lymphotec｜MatTek｜Merck｜Millipore｜MicroSurfaces｜MIMETAS｜Minerva Bio｜Mission Bio｜Multispan｜NanoCellect｜NanoView｜NBRC｜NEXEL｜NIBSC｜NINDS

O-Z

Oetltd｜OXB｜PELO Biotech｜UKHSA｜PHI｜PhoenixBio｜Platypus｜pluriSelect｜PRIMACYT｜Reachbio｜S2genomics｜SB Drug Discovery｜SBH Sciences ｜S-BIO｜Sexton｜Solentim｜StemCultures ｜Synthego｜Tempo Bioscience｜Tissue Solutions｜Unchained Labs｜ValitaCell｜VYCAP｜WiCell｜Xcell Biosciences｜ XCell Science｜xpresscells

点在看，传递你的品味

收藏点赞(0)

本文分类：Merck
本文标签：
Merck IHC
浏览次数：110 次浏览
发布日期：2024-03-21 16:37:06
本文链接：https://cell.ucallm.com/Merck/2258